,هورمونی,الایزا,کیت,آزمایشگاه,فاسکو ,هورمونی,الایزا,کیت,آزمایشگاه,فاسکو
 
 
2 نظرات  Protein measurement using Biuret method
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۶ دي  [11:26]  

 

Protein measurement using Biuret method

 

 

اندازه گیری اسپکتروفتومتریک پروتئین به روش بیوره

اندازه گیری اسپکتروفتومتریک پروتئین به روش بیوره

مکانیسم اندازه گیری پروتئین به روش بیوره تشکیل کمپلکس بین یونهای مس دو ظرفیتی(Cu 2+) و پیوندهای پپتیدی است و برای تشکیل کمپلکس نیاز به حداقل دو پیوند پپتیدی است تا کمپلکس تشکیل گردد که کمپلکس تشکیل شده رنگ آبی دارد . جذب رنگ آبی تولید شده را در طول موج 540 نانومتر خوانش می کنند و از آنجایی که جذب با غلظت ارتباط مستقیم دارد طبق قانون بییر – لامبرت  با رسم یک منحنی استاندارد مقادیر پروتئین مجهول در نمونه قابل اندازه گیری است .

 

محلول های روش بیوره

1-     محلول سدیم هایدروکساید 6 مولار ( NaOH = 6 M).

2-     محلول بیوره : 1.50  گرم سولفات مس دو ظرفیتی را در 250  میلی لیتر آب دیونیزه حل کنید .4.5  گرم  سدیم پتاسیم تارتارات و 2.5 گرم یدید پتاسیم به آن اضافه نمایید . پس از حل شدن این مواد 50 میلی لیتر NaOH  6 مولار به آن اضافه نمایید و بعد حجم را به 500 میلی لیتر برسانید . محلول در دمای اتاق به مدت 6   ماه پایدار است .

3-     بلانک محلول بیوره : این محلول را دقیقا مانند مرحله 2 تهیه نمایید ولی فقط سولفات مس دوظرفیتی را از فرمول حذف نمایید.

4-     محلول سدیم آزاید 1.5 mM

5-     استاندارد پروتئین : با استفاده از آلبومین یک سری استاندارد 20- 40-60-80-100  گرم در لیتر تهیه نمایید .

 

روش انجام

1-     5 سی سی از محلول بیوره را به داخل هر یک از 7 لوله آزمایش بریزید

2-     5 سی سی از محلول بلانک بیوره را به داخل هر یک از 7 لوله بریزید

3-     100 میکرولیتر از هر یک از سری استاندارد پروتئین ساخته شده را به داخل 5 لوله تست حاوی

محلول بیوره بریزید و به لوله  ششم آب اضافه کنید و در لوله هفتم 100 میکرولیتر نمونه مجهول

اضافه نمایید .

4-     30 دقیقه در دمای اتاق لوله ها را بگزارید تا واکنش انجام شود

5-     در طول موج 540 nm  به توسط بلانک اسپکتروفتومتر را صفر کرده و جذب استانداردها را بخوانید

و با استفاده از منحنی استاندارد رسم شده و جذب نمونه مجهول مقدار نمونه مجهول را بدست اورید

 

Dorey and Draves

University of Central Arkansas

Department of Chemistry

Conway, AR 72035

Update: 5/98

 

 

روش ها و محلول های ذکر شده در بالا به نظر پیچیده می آیند طوری که کسی ممکن است فکر کند نمی شود این روش را تبدیل به کیت کرد در حالی که اگر بیشتر روی ان تمرکز شود می توان این روش را تبدیل به کیت اندازه گیری پروتئین نمود . فقط کافی است روی چند عامل کار شود

1-       برای کاهش زمان واکنش غلطت واکنشگر ها را افزایش دهید مثلا حجم نمونه را 200 میکرولیتر نمایید و یا اجزای محلول بیوره را افزایش دهید و اثر آنرا ببینید

2-     چنانچه دریافتید منحنی استاندارد همیشه خطی بدست می اید فقط یک استاندارد در کیت  بگنجانید

3-     روش را به تناسب حساسیتی که لازم دارید می توانید دستکاری کنید ممکن است این روش ذکر شده جهت حساس تر کردن روش به این شکل انجام می شود در حالی که شما به چنین حساسیتی نیاز نداشته باشید

 

چنانچه شما نیز نظری دارید که به این ها اضافه شود نظر بدهید تا اضافه کنم و علاقه مندان بتوانند از آن کیت بسازند




3 نظرات  اندازه گیری پروتئین - protein measurement using biuret method
  تاریخ : ۱۳۸۹ چهارشنبه ۸ دي  [13:18]  

Protein measurement using Biuret method

 

اندازه گیری اسپکتروفتومتریک پروتئین به روش بیوره

 

مکانیسم اندازه گیری پروتئین به روش بیوره تشکیل کمپلکس بین یونهای مس دو ظرفیتی(Cu 2+) و پیوندهای پپتیدی است و برای تشکیل کمپلکس نیاز به حداقل دو پیوند پپتیدی است تا کمپلکس تشکیل گردد که کمپلکس تشکیل شده رنگ آبی دارد . جذب رنگ آبی تولید شده را در طول موج 540 نانومتر خوانش می کنند و از آنجایی که جذب با غلظت ارتباط مستقیم دارد طبق قانون بییر – لامبرت  با رسم یک منحنی استاندارد مقادیر پروتئین مجهول در نمونه قابل اندازه گیری است .

 

محلول های روش بیوره

1-     محلول سدیم هایدروکساید 6 مولار ( NaOH = 6 M).

2-     محلول بیوره : 1.5  گرم سولفات مس دو ظرفیتی را در 250  میلی لیتر آب دیونیزه حل کنید .4.5  گرم  سدیم پتاسیم تارتارات و 2.5 گرم یدید پتاسیم به آن اضافه نمایید . پس از حل شدن این مواد 50 میلی لیتر NaOH  6 مولار به آن اضافه نمایید و بعد حجم را به 500 میلی لیتر برسانید . محلول در دمای اتاق به مدت 6   ماه پایدار است .

3-     بلانک محلول بیوره : این محلول را دقیقا مانند مرحله 2 تهیه نمایید ولی فقط سولفات مس دوظرفیتی را از فرمول حذف نمایید.

4-     محلول سدیم آزاید 1.5 mM

5-     استاندارد پروتئین : با استفاده از آلبومین یک سری استاندارد 20-40-60-80-100گرم در لیتر تهیه نمایید .

 

ادامه دارد ......




1 نظرات  اندازه گیری فسفات - phosphate assay
  تاریخ : ۱۳۸۹ دوشنبه ۶ دي  [12:43]  



 اندازه گیری فسفات

Phosphate assay

 

 

1-     با استفاده از سدیم فسفات یک سری استاندارد با غلظت های 0-2-5-10-30-60 میکرومولار در آب دیونیزه

 بسازید .

2-     150 میکرولیتر اسید پرکلریک 70% به استاندارد ها و لوله نمونه ها اضافه نمایید و به مدت یک 1 ساعت در صفحه داغ 200 درجه سانتی گراد قرار دهید تا نمونه ها کاملا اکسید شوند و فسفاتهای آلی نیز به صورت فسفات معدنی آزاد گردند.

3-     170 میکرولیتر آمونیوم مولیبدات 2.5% (w/v) به تمام لوله ها اضافه نمایید .

4-     170 میکرولیتر آسکوربیک اسید 10% به تمام لولها اضافه نمایید

5-     15 دقیقه در 50 درجه انکوبه نمایید و سپس سرد نمایید

6-     در طول موج 820 نانومتر جذب استانداردها و نمونه ها را خوانش کرده و غلظتهای مجهول را با استفاده از منحنی استاندارد رسم شده بدست آورید.

 

 

ظاهرا بعضی از مراحل قابل حذف می آیند مانند مراحل 2 و 5  چون به نظر می آیند که برای اندازه گیری فسفات های آلی و یا افزایش سرعت واکنش در نظر گرفته شده اند اما شما فعلا این مراحل را حذف نکنید و زمانی که خواستید این روش را اصلاح کنید تا کیت اندازه گیری فسفات از آن بسازید روی حذف این دو مرحله کار کنید و اگر زمانی این روش را تبدیل به کیت اندازه گیری فسفات نمودید آقای jiandi zhang که این روش را به این صورت اصلاح نمودند از دعای خیرتان محروم نکنید.








نظرات :
نام کاربری :
نام رمز :
 

آدرس این وب لاگ
 
gholamali nazary
ghnazary
آرشيو نوشته ها
1391/3   1390/6   1390/11  
1391/2   1390/5   1390/10  
1390/9   1390/4   1389/7  
1390/8   1390/3   1389/10  
پیوندها
پیاده سازی و اجرا : پریسان  

کلیه حقوق این سایت برای  وب سایت جامع علوم آزمایشگاهی و پزشکی فاسکو محفوظ است ©

بارتونلا, RBC, ویتامین, پژوهشی, سلول های بنیادین, تستهای آزمایشگاهی (CEA, залив, فشار زیادی روی معده, Analysis, اگریشین, ترماتودهای, لکوسیتها, شخصیت های آزمایشگاهی, اپیدمی, مادر, میوگلوبین, نمونه هاي ادرار - واژن - مدفوع - خلط - مايع مفصل - csf , نوتروفیلها, ائوزينوفيليك, پيلوري, سلول‌هایی, CML, ویروسها, ارگانیسم, نوتروفيل, هموگلوبین, نماينده انحصاري, بیماری حصبه یا تیفوئید , آمیلوپکتین, Tyrosine, هموگلوبین, ميكروسكوپي, مخمرها, کربوهیدراتها, ناهمگام‌سازی, افزایش تیتر IgM, فهرست آزمایش های بیوشیمی, نایروویروس, هماتوكريت, Homogeneous, پیام تبریک روز علوم آزمایشگاهیان, ویروسها, آنالیز, CHOLESTEROL‌, برونكوآلوئولار, هلیکوباکتر, سنتتازها, آپولو, آلکالوز, آنیزوسیتوز, تومور مغزی, هماتو, هليكوباكتر, هموگلوبین, تروپونین, فشار خون بالا , سلول‌های سرطانی در مایع مغزی, کروموزومی, ویتامین, عدم رعایت بهداشت دهان و دندان, گوآتمالارا, نانوباکتر, اگزالواستیک, لپتین, همولیتیک, هپاتیت, پروتئین FGF1, دترژنتهای, صرع چیست, عباس فرزانگان,