,هورمونی,الایزا,کیت,آزمایشگاه,فاسکو ,هورمونی,الایزا,کیت,آزمایشگاه,فاسکو
 
 
1 نظرات  میزان بالای کلسترول لیپوپروتئین (HDL) می تواند موجب کاهش خطر ابتلا به سرطان شود
  تاریخ : ۱۳۸۹ سه شنبه ۲۹ تير  [0:15]  

ارتباط میان کلسترول خوب ( HDL  ) و کاهش خطر ابتلا به سرطان
تحقیقات جدید محققان نشانگر آن است که میزان بالای کلسترول لیپوپروتئین که با نام کلسترول خوب ( HDL  )  شناخته می‌شود، می‌تواند باعث کاهش خطر ابتلا به سرطان و سکته‌های قلبی شود.
به گزارش خبرنگار سایت پزشکان بدون مرز به نقل از رویترز ،  در حالی که پیش‌تر نتیجه تحقیقات انجام گرفته حکایت از آن داشت که پایین آمدن میزان کلسترول خوب در خون می‌تواند به کاهش خطر ابتلای افراد به سرطان منجر شود تحقیقات اخیر عکس این مسئله را اثبات کرده و بیانگر آن است که اتفاقا بالا رفتن میزان کلسترول خوب در خون می‌تواند باعث کاهش احتمال ابتلای افراد به سرطان شود.
این تحقیقات اخیر نیز توسط تیمی از محققانی که پیشتر مضر بودن کلسترول خوب خون برای سرطان را اثبات کرده بودند انجام گرفته است.

 

دکتر ریچارد کاراس از مؤسسه تحقیقاتی کاردیولوژی مولکولی وابسته به دانشگاه تافتز در شهر بوستون آمریکا  به همراه همکارانش بررسی‌هایی را بر داروی استاندارد استاتین که برای کاهش میزان کلسترول خون مورد استفاده قرار می‌گیرد انجام داده است. این تحقیقات به‌منظور بررسی ارتباط میان میزان بالای کلسترول خوب خون ( HDL  ) یا لیپوپروتئین با کاهش خطر ابتلای افراد به سرطان انجام گرفته است.

 

داروی استاتین، کلسترول مخرب ال دی ال را در حدود ۵۰ درصد کاهش و میزان اچ‌دی ال یا کلسترول خوب را در حدود ۱۵ درصد افزایش می‌دهد.

 

علاوه بر این تحقیقات نشان داده است که میزان بالای کلسترول خوب سبب کاهش احتمال خطر ابتلای افراد به سکته قلبی می‌شود.کلسترول خوب از بروز حملات قلبی جلوگیری می‌کند. هرگاه فرد، یک رژیم پرچربی داشته باشد و مقدار اچ دی ال خونش کم باشد، زمینه ابتلای فرد به بیماری قلبی مهیا می‌شود.

 

( HDL  ) اچ دی ال، کلسترول خوب و مفیدی است؛ زیرا باعث پیشگیری از حملات قلبی می‌شود.اچ دی ال، کلسترول را از جریان خون به کبد انتقال می‌دهد. درآنجا کلسترول به صفرا تبدیل شده و قبل از اینکه باعث ایجاد لخته درسرخرگ‌ها شود، از بدن دفع می‌شود.در واقع هرچقدر میزان کلسترول خوب اچ دی ال بیشتر باشد، احتمال خارج شدن چربی‌ها از جریان خون بیشتر بوده و خطر بیماری قلبی کاهش می‌یابد.

 

کلسترول یک ماده شبه چربی (واکس مانند) در خون است که در بدن توسط کبد تولید می‌شود و در بعضی غذاها مثل فراورده‌های حیوانی نظیر لبنیات، تخم مرغ و گوشت وجود دارد. برای فعالیت عادی بدن به مقدار اندکی کلسترول نیاز است.(مثلا برای ساخت غشا و دیواره‌های سلول‌ها، تولید هورمون‌ها، ویتامین دی و اسیدهای صفراوی جهت هضم غذاها) ولی این نیاز بسیار اندک است. بالا رفتن میزان کلسترول بد در خون موجب بعضی ناراحتی‌ها از جمله بیماری کرونری قلب می‌شود.

 

وقتی کلسترول بد خون LDL  بالا باشد تجمع و رسوب آن در بعضی رگ‌های خونی ظریف از جمله رگ‌های کرونری قلب تولید پلاک یا آتروم می‌کند و مسیر عبور خون را تنگ کرده یا باعث انسداد آن می‌شود. در اثر کم شدن خون‌رسانی از این رگ‌ها و در نتیجه کم شدن اکسیژن مورد نیاز بافت قلب، فرد دچار درد قفسه سینه (آنژین‌صدری) خواهد شد.

درصورتی‌که یک یا چند رگ کرونری قلب به‌طور کامل مسدود شده باشد فرد دچار سکته (انفارکتوس) قلبی خواهد شد.





1 نظرات  تریپتوفان
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:22]  

این اسید آمینه جزو شاهکارهای خلقت است. نه قند ساز است و نه کتون ساز.  تریپتوفان با اسید آمینه های حلقوی دیگر گیرنده مشترک دارد و اگر بقیه زیاد شوند تریپتوفان وارد مغز نمی شود. "من دارم از گرسنگی می میرم ناهارم را دیر آوردی اشتهام کور شد" مکانیسم به این صورت است که در شخص گرسنه، پروتئین به اسید آمینه تبدیل می شود و با تریپتوفان رقابت می کند در ورود به مغز، در نتیجه سروتونین کم می شود وشخص احساس گرسنگی می کند وبعد از مدتی یواش یواش اسیدهای آمینه به قند تبدیل می شوند وبرای تریپتوفان راه باز می شود، وارد مغز می شود و سروتونین ساخته می شود که جلوی اشتها را می گیرد. شاهکار دیگر اینکه ملاتونین در تاریکی بهتر ساخته می شود و در جاهایی که روز کوتاه می شود تریپتوفان به جای تبدیل به سروتونین بیشتر به ملاتونین تبدیل می شود و سروتونین کم می شود. از یک طرف اشتها زیاد شده و شخص چاق می شود و از طرف دیگر به دلیل کمبود سروتونین شخص افسرده می شود. شاید حکمتی داشت که تریپتوفان نه قند ساز است و نه کتون ساز.




0 نظرات  دقت تست های بارداری
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:22]  

بسیاری از مادران به دو دلیل این سوال را می‌پرسند. برخی جواب آزمایشات در شرایطی که مادر در آرزوی بارداری است منفی است و در بعضی از مادران که دوست دارند جواب آزمایش بارداری‌ منفی باشد، مثبت است. آزمون‌های کنترل بارداری در خانه دقت بالایی دارند. این آزمون‌ها در صورتی که در زمان مناسب در یک چرخه قاعدگی و بعد از انجام روابط جنسی انجام گیرد بین ۹۵ تا ۵/۹۹ درصد دقت دارند. مناسب ‌ترین و زودترین زمان بدست آوردن دقیق‌ترین نتیجه آزمون بارداری، دو روز قبل از شروع قاعدگی جدید و یا ۱۲ روز بعد از روابط جنسی است. انجام تست حاملگی در غیر از این زمان ها هدر دادن هزینه است. زیرا باید برای اطمینان بیشتر مجدد انجام شود. گاهی اوقات ممکن است جواب منفی بگیرید و مجبور شوید مجددا آزمایش دهید.

 

دلایلی که موجب نتایج مثبت کاذب می‌شود شامل:

۱- استفاده از ظرف جمع‌آوری آلوده ممکن است نمونه را با مواد دیگر آلوده کند

۲- استفاده از کیت‌های قدیمی می‌تواند نتیجه غلط بدهد

۳- استفاده از نمونه ادرار آلوده شده به خون و یا ادرار عفونی که می‌تواند سبب نتایج غلط شود

۴- استفاده از بعضی داروهای خاص مانند ضد تشنج‌ها،‌ضد پارکینسون، مدرها،‌پرومتازین ها

 

این دلایل منتهی به جواب منفی کاذب می‌شوند:

۱- انجام آزمایش بارداری بسیار زودتر از زمانی که در بالا ذکر شد. قابل ذکر است بین ۱ تا ۱۰ روز بعد از عقب‌افتادن قاعدگی مجدد، صبر کنید و سپس آزمایش را انجام دهید

۲- زمان انجام آزمون بسیار مهم است و نمونه ادرار نباید بیشتر از ۱۵ دقیقه بماند.

۳- بعد از نوشیدن مقدار زیادی مایع از نمونه ادرار استفاده نکنید زیرا ادرار بسیار رقیق است. بهترین زمان برای نمونه‌گیری ادرار در اولین ساعات روز و زمانی است که ادرار بیشترین غلظت را دارد.




0 نظرات  هر میکروبی می تواند در یخ جامد زنده بماند
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:20]  

هر میکروبی می تواند در یخ جامد زنده بماند

ميكروب‌هاي گرفتار شده در بلورهاي يخ مي‌توانند براي بيش از 100  هزار سال زير 3 كيلومتر برف زنده بمانند. اين يافته از اين نظريه پشتيباني مي‌كند كه شايد زندگي در دور دست‌ها در جهان‌هاي يخي سامانه‌ي خورشيدي ما وجود داشته باشد.

  باكتري‌هاي زنده در نمونه‌هاي برداشت‌ شده از ژرفاي 4 كيلومتري جنوبگان پيدا شده‌اند، گرچه برخي دانشمندان گفته‌اند كه آن ميكروب‌ها در پي آلودگي نوك مته‌ها يا در آزمايشگاه به بلورهاي يخ راه يافته‌اند. اما در سال 2005 نيز باكتري‌هايي با ديرينگي 32 هزار سال به صورت خفته در آبگير يخ ‌زده‌اي در آلاسكا يافت شدند.

  اكنون بافورد پرايس و رابرت رُده، فيزيكدان‌هاي دانشگاه كاليفرنيا در بركلي ايالات متحده‌ي آمريكا، سازوكاري پيشنهاد كرده‌اند كه توضيح مي‌دهد چگونه ميكروب‌ها مي‌توانند در چنين شرايط سختي زنده بمانند.

آنان مي‌گويند لايه‌ي نازكي از آب مايع خودبه‌خود پيرامون ميكروب را فرا مي‌گيرد. سپس، گازهاي اكسيژن، هيدرژن، متان و گازهاي ديگر از حباب‌هاي هوا به درون آن انتشار مي‌يابند و غذاي كافي را براي ميكروب فراهم مي‌سازند.

بنابراين، هر ميكروبي مي‌تواند در يخ جامد زنده بماند و دماي پايين‌تر از 55- درجه سلسيوس و فشار 300 اتمسفر را تحمل كند. در چنين شرايطي ميكروب‌ها نمي‌توانند توليد مثل كنند، اما مي‌توانند هر آسيب مولكولي را ترميم كنند و تا هزاران سده زنده بمانند.





0 نظرات  تست کومبز
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:19]  

از این تست برای شناسایی آنتی بادی های ناقص- که بر روی RBC نشسته و آنها را حساس کرده است استفاده می شود. این تست به دو روش مستقیم و غیر مستقیم انجام می شود. اساس این تست بر ایجاد شبکه بین آنتی بادی های ناقص در سطح گلبول های قرمز حساس شده (توسط AHG) برای ایجاد آگلوتیناسیون می باشد. این تست در دو مرحله کلی انجام می شود:

1. مرحله حساس شدن

2. اضافه کردن معرف کومبز

کومبز مستقیم

از کومبز مستقیم برای شناسایی آنتی بادی های ناقص متصل به RBC جنین استفاده می شود . تفاوتی که بین کومبز مستقیم و غیر مستقیم وجود دارد این است که،  مرحله حساس شدن گلبول های قرمز در بدن جنین اتفاق می افتد. عامل اصلی حساس شدن RBC (در 75 % موارد) ناسازگاری گروه های خونی RH میباشد هر چند که گروه های خونی ABO در 25 درصد موارد هم می توانند باعث حساس شدن RBC شوند.

ناسازگاری RH

اگر خون جنین+Rh   و خون مادر -Rh باشد آنتی بادی های تولید شده از کلاس Igg در بدن مادر از جفت عبور کرده و باعث حساس شدن RBC های جنین می شود.

 ناسازگاری ABO

این ناسازگاری زمانی باعث حساس شدن RBC می شود که گروه خونی مادرO و گروه خونی جنین AB باشد در این صورت آنتی بادی 3Igg آنتی AB موجود در سرم مادر به جنین منتقل شده و باعث حساس شدن RBC جنین می شود.

روش انجام تست کومبز مستقیم

خون بند ناف را گرفته و از آن سوسپانسیون 5 درصد گلبول های قرمز تهیه می کنیم. چون مرحله حساس شدن RBC در بدن جنین اتفاق افتاده است بنابراین نیازی به انکوبه کردن نیست.

1/0 میلی لیتر از سوسپانسیون 5 درصد RBC را به 1/0میلی لیتر AHG اضافه می کنیم و برای تشکیل شبکه بین RBC، لوله های تست را به مدت 3 تا 5 دقیقه در دمای آزمایشگاه نگه می داریم. بعد از 5 دقیقه، لوله ها را در1000و به مدت یک دقیقه سانتریفیوژ می کنیم. در آخر هم لوله ها را از نظر آگلوتیناسیون با زدن ضربه ای ضعیف به لوله، بررسی می کنیم.

بررسی نتایج

اگر آگلوتیناسیون مشاهده شود، نشان دهنده حساس بودن RBC جنین است و باید تعیین تیتر شود (که در این تعیین تیتر، AHG را رقیق می کنیم نه سرم را) چون در زایمان دوم به بعد باعث HDN در نوزادان می شود.

 کومبز غیر مستقیم

از کومبز غیر مستقیم برای شناسای RBC حساس شده در محیط In vitro استفاده می شود. مرحله حساس شدن RBC ها در این روش توسط انکوباسیون انجام می شود. مراحل بعدی تقریبا مشابه کومبز مستقیم است. در این تست آنتی بادی های ناقص، در خون مریض (مادر) وجود دارد. این آنتی بادی ها به دو علت عمده ممکن است تولید شوند:

1. انتقال خون

2. زایمان اول

برای بررسی وجود و یا عدم وجود این آنتی بادی، از سوسپانسیون 5 درصد RBC، گروه خونی +O استفاده می شود. چون آنتی بادیهای ناقص، شاخص های آنتی ژن RBC های گروه خونی +O  را حساس و با اضافه کردن AHG باعث ایجاد آگلوتیناسیون می شود.

علت استفاده از +O  

برای اینکه ناسازگاری گروه های خونی ABO را از بین ببریم از این گروه خونی استفاده می کنیم چون اگر  گروه های خونی A,B,AB استفاد شود، در این صورت ممکن است آنتی بادی ضد AB گروه خونی O باعث حساس شدن سوسپانسیون شود.

و علت اینکه از +RH استفاده می کنیم این است که می خواهیم آنتی بادی های ناقص بر روی آنتی ژن های +RH بشیند و بتوانیم آگلوتیناسیون را مشاهده کنیم. اگر -RH باشد در روی RBC، آنتی ژنی وجود نخواهد داشت تا RBC توسط آنتی بادی حساس شود.

 روش انجام تست کومبز غیر مستقیم

1/0میلیمتر از سرم بیمار را با 1/0میلیمتر از سوسپانسیون 5 درصد مخلوط می کنیم و سپس لوله آزمایش را به مدت 30 تا 40 دقیقه در انکوباتور 37 درجه قرار می دهیم در این مرحله RBC در صورت وجود انتی بادی ناقص در سرم، حساس خواهند شد. بعد از این مدت، لوله آزمایش را به مدت یک دقیقه در دور 1000 سانتریفیوژ می کنیم. و سه بار توسط سرم فیزیولوژی شستشو می دهیم تا آنتی بادی های غیر اختصاصی حذف شوند و فقط آنتی بادی های اختصاصی که به شاخص های انتی ژنی RBC چسبیده اند، باقی بمانند. بعداز این مراحل یک قطره AHG به لوله اضافه می کنیم و بعد از 3 تا 5 دقیقه لوله را به مدت یک دقیقه در دور 1000 سانتریفیوژ می کنیم و در آخر هم با زدن ضربه ای ضعیف آگلوتیناسیون را برسی می کینم.

بررسی نتایج

اگر آگلوتیناسیون مشاهده شود تست کومبز غیر مستقیم بیمار را مثبت گزارش می کنیم.

چند نکته:

1- قبل از انکوبه با اضافه کردن دو قطره آلبومین می توان آگلوتیناسیون را بهتر بررسی کرد.

2- اگر بعد از انکوبه، آگلوتیناسیون مشاهد شود نشان دهنده این نکته است که در سرم ما آنتی بادی کامل وجود دارد و در واقع Back Type را انجام داده ایم.

3- برای بررسی آگلوتیناسیون بهتر است از میکروسکوپ استفاده کنیم.

 روش تهیه سوسپاسیون 5 درصد

2 قطره خون داخل لوله آزمایش می ریزیم. 3 میلی لیتر  سرم فیزیولوژی به لوله اضافه می كنیم و در سانتریفیوژ در دور 3000 به مدت 5 دقیقه قرار می دهیم سپس مایع رویی را خالی كرده و این كار را تا 3 بار تكرار می كنیم.




0 نظرات  اتوکلاو
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:18]  

اتوکلاو دستگاهی است که برای استریل کردن مواد و تجهیزات در آزمایشگاه توسط فشار شدید بخار در دمای 121 درجه سانتی گراد به مدت 15 یا 20 دقیقه است این زمان بستگی به نوع ماده و محتوای اتوکلاو دارد. این دستگاه در سال 1879 توسط چارلز چامبرلند (Charles Chamberland ) اختراع شد. 

انواع اتوکلاو

دو نوع اصلی اتوکلاو وجود دارد:

صفحه اتوکلاو در بالا: این اتوکلاو ای شبیه زودپز هایی است که به فور در خانه های ایرانی یافت می شود. در این اتوکلاو ها، در اتوکلاو توسط پیچ هایی در پایین بسته می شود و فشار سنجی در بیرون برای کنترل فشار قرار دارد. این دستگاه ها نیاز به منبع حرارت خاریجی دارند و بسیار خطرناک هستند (اگر ظرف توسط فشار منفجر شود سقف و پایین میاره) بنابراین آنها باید توسط افراد بسیار با تجربه مورد استفاده قرار بگیرند.  

صفحه اتوکلاو روبه رو: این اتوکلاو ها به خاطر راحتی استفاده از آنها به طور وسیع مورد استفاده در آزمایشگاه ها قرار می گیرند اما در استفاده از این اتوکلاو ها باید نهایت دقت را کرد. این اتوکلاو ها جعبه ای شکل هستند و در درونشان مجهز به واحد تبدیل آب به بخار دارند که برای استریل کردن استفاده می شود. کنترل اتوکلاو به اپراتور این امکان را می دهد تا دمای مورد نظر را تنطیم کند و مدت زمان اتوکلاو را تعیین کند همچنین این اتوکلاو ها وسیله ای برای اندازه گیری و نمایش فشار/دما را دارند.

اتوکلاو هایی که از جلو باز میشوند ممکن است بسیار بزرگتر باشند که برای استریل کردن مواد و وسایل زیاد در بیمارستان ها مورد استفاده قرار می گیرد. 

موارد کاربرد اتوکلاو

اتوکلاو و علوم آزمایشگاهی دو جز جدا نشدنی از هم هستند. اتوکلاو در بسیار از زمینه ها مانند: میکروب شناسی، پزشکی، دامپزشکی، قارچ شناسی، دندان پزشکی و ... مورد استفاده قرار می گیرد.

ظروف شیشه ای، زباله های پزشکی، ظروف آزمایشگاهی، ملافه های حیوانات آزمایشگاهی، محیط های کشت و... موادی است که توسط اتوکلاو اسنریل می شوند.

امروزه استفاده از اتوکلاو برای استریل کردن زباله های بیمارستانی به سرعت در حال رشد است. وسائل و دستگاههایی که برای استریل کردن این مواد و زباله ها استفاده می شود از همان روش بخار و فوق حرارت هستند و با هم فرقی ندارند و باعث استریل شدن توده ای وسیع از زباله های بیمارستانی از عوامل پاتوژن می شوند. نسل جدیدی از مبدل های زباله به بازار امده که بدون استفاده از فشار بسیاری از مواد مانند محیط های کشت، دستکش ها، گان ها، لباس ها و مواد پلاستیکی را استریل می کند. این دستگاه ها مناسب برای موادی هستند که نمی توانند دمای بالای اون را تحمل کنند.

برای سرنگ های شیشه ای، اوون بهترین راه استریلاسیون است.

حذف هوا

بعد از بستن در اتوکلاو، مقداری هوا در ظرف باقی می ماند و باید حذف شود. علت آن این است که هوای گرم در مقایسه با بخار به مدت زمان زیادی برای استریل کردن نیاز دارد. برای مثال: بخار در دمای 134 درجه سانتی گراد به 3 دقیقه وقت برای استریل کردن مواد نیاز دارد در حالی که هوای گرم 160 درجه سانتی گراد در همان شرایط به دو ساعت وقت نیاز دارد. روش های حذف هوا در اتوکلاو به شرح زیر است:

حذف هوا از پایین (Downward displacement): زمانی که بخار وارد محفظه می شود به علت پایین بودن چگالی آن نسبت به هوای گرم در بالای محفظه قرار می گیرد و با افزایش میزان بخار رفته رفته هوای گرم در زیر اتوکلاو فشرده می شود و از قسمت پایینی تخلیه می شود. معمولا در قسمت خروجی دماسنجی برای کنترل دمای هوای خروجی می گذارند. تنها زمانی که هوا از محفظه خارج شد باید تخلیه کردن را متوقف کنیم. جریان معمولا توسط تله های بخاری و یا سوپاپ های مارپیچی کنترل می شود.

پالس های بخار (Steam pulsing): در این روش هوای موجود در محفظه اتوکلاو توسط پالس های بخار فشرده می شود تابه فشار اتمسفر نزدیک شود.

پمپ های وکیوم (Vacuum pumps): این پمپ ها هوا و یا هوا/بخار را از محفظه مکش می کنند.

سوپر اتمسفر (Superatmospheric ): در این چرخه از پمپ های وکیوم استفاده می شود. به دنبال پالس بخار مکش انجام می شود و به دنبال سایر پالس ها مکش ادامه می یابد. میزان مکش ها بستگی به چرخه و نوع دستگاه دارد.

 زیر اتمسفر (Subatmospheric ): مشابه چرخه superatmospheric است اما فشار محفظه هرگز بیش از اتسمفر نیست تا زمانی که فشار به دمای استریل کردن افزایش یابد.

اتوکلاو در پزشکی و علوم آزمایشگاهی

بجث هایی که در بالا کردیم بیشتر جنبه عمومی داشت اما در این قسمت در مورد اتوکلاو های پزشکی بحث خواهیم کرد. اتوکلاو های پزشکی دستگاه هایی هستند که برای استریل کردن (کشتن تمام شکل های میکروارگانیسم هاو اسپورها ) مواد و ظروف پزشکی استفاده می شود. در این مرحله یعنی استریل کردن تمام شکل باکتری ها، ویروس ها، انگل ها، قارچ ها و اسپور ها از بین می روند اما پریون ها - عامل جنون گاوی( بیماری كروتزفلد- یاكوب) - در اتوکلاو به مدت ۳ دقیقه در دمای ۱۳۴ درجه و یا اتوکلاو به مدت ۱۵ دقیقه در دمای ۱۲۱درجه از بین نمی روند. همچنین تعدای از میکروارگانیم ها اخیرا کشف شده اند که قادر به رشد در دمای بالاتر از ۱۲۱ درجه سانتی گراد هستند.

اتوکلاو ها در بسیاری از زمینه های پزشکی و مراکزی که نیاز به استریل کردن مواد دارند یافت می شوند. نکته ای که باید به آن توجه کرد این است که امروزه بیشتر از وسائل یکبار مصرف استفاده می شود در نتیجه وسائل نیاز به استریل دوباره ندارند. این اتفاق (استفاده از مواد یک بار مصرف بدون نیاز به بازیابی دوباره) برای اولین بار در مورد نیدل ها استفاده شده است  اما امروزه بسیاری از مواد جراحی به صورت یک بار مصرف استفاده می شوند.

همه مواد توسط اتوکلاو استریل نمی شوند برای مثال ممکن است بعضی مواد پلاستیکی ذوب شوند و یا بعضی مواد کاغذی نتوانند میزان بالای فشار بخار را تحمل کنند در این موارد باید از اتو و یا سایر روش هاس استریل کردن (اشعه، مواد شیمیایی و... ) استفاده کرد. در ضمن زمانی که می خواهیم مواد را داخل اتوکلاوقرار دهیم باید از دیواره و یا سایر مواد موجود فاصله باشد تا بخار به راحتی در بین مواد حرکت کند. 

قبل از دفع هر گونه زباله بیمارستانی و یا پزشکی باید این مواد اتوکلاو شوند و بعد از استریل شدن و عاری از پاتوژن ها مانند سایر زباله ها و طبق روش های استاندارد دفع شوند. همان طور که گفتیم با اتوکلاو تقریبا ۹۹٪ پاتوژن ها از بین رفته و مواد استریل می شوند بنابراین در صورت اتوکلاو نکردن (یا هر روش دیگر استریلی) این پاتوژن ها وارد محیط خودمان می شوند و هم به محیط اطراف خود ضرر خواهند زد و هم به سلامتی خود.

کنترل کیفی اتوکلاو

اندیکاتور های شیمیایی، فیزیکی و بیولوژی برای بررسی دما و زمان اتوکلاو به صورت تجاری وجود دارد. شاخص های شیمیایی به صورت نوار های اتوکلاو (چسب اتوکلاو) و یا بسته های پزشکی هستند که وقتی به دمای معینی رسیدند تغییر رنگ می دهند. برای نمونه: دارای نوار های سیاه در زمینه سفید هستند که بر روی موادی که می خواهند اتوکلاو شوند می زنیم و اگر اتوکلاو ما درست کار کرده باشد در دمای ۱۲۱درجه نوار های سیاه از بین می روند. اندیکاتور های بیولوژی شامل اسپر باکتری هایی هستند که به حرارت مقاوم هستند مانند: Geobacillus stearothermophilus. اگر اتوکلاو به دمای مورد هدف نرسد در این صورت اگر کلنی های اسپور دار باکتری مورد نظر را انکوبه کنیم جوانه خواهند زد و به علت متابولیسم آنهادر محیط PH را تغییر و در آخر باعث تغییر رنگ محیط خواهند شد. برخی از شاخص های فیزیکی از آلیاژ هایی تشکیل شده اند که در دمای مورد نظر ذوب می شوند.

بعضی از اتوکلاو هایی که توسط رایانه کنترل می شوند توسط سیستم F0 - F-nought چرخه استریلاسیون را کنترل می کنند. مقدار F0 بر روی مقدار دقیقه ست می شود که برابر با 121درجه سانتی گراد و یا 249 درجه فارینهایت و یا فشار 15lbs بالاتر از فشار اتمسفر در 15 دقیقه است. از آنجا که کنترل دقیق درجه حرارت دشوار است دما مانیتور می شود (کنترل می شود در یک محدوده خاص) تا زمان استریلاسیون به پایان برسد.




0 نظرات  Polymerase Chain Reaction) PCR)
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:17]  

واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) روشی است که  قسمتی  از سکانس مولکول DNA که بین دو پرایمر قرار دارد توسط آنزیم پلیمراز و به کمک چهار داکسی نوکلئوتید تری فسفات در آزمایشگاه تکثیر (Amplify) می شود.dsDNA متشکل از دو رشته آنتی پارالل می باشد که توسط اتصالات هیدروژنی و به صورت کووالانت به یکدیگر متصل هستند.

همانند سازی DNA به کمک الیگو نوکلئو تیدهایی که پرایمر گفته می شوند انجام می گیرد. الیگونوکلئوتیدها مولکولهای DNA تک رشته کوتاه هستند که هر کدام از آنها مکمل یک انتهای سکانس DNA هدف (الگو) می باشند.

پرایمر ها توسط آنزیم DNA  پلیمراز و در حضور dNTPها از روی DNA الگو (تک رشته ای است) همانند سازی می کنند و رشته های جدیدی مکمل رشته های هدف سنتز  می گردد.

 

مراحل یک سیکل PCR:

۱- مرحله Denaturation: در این مرحله DNA هدف بر اثر حرارت تک رشته ای می شود.

۲- مرحله Annealing: در این مرحله با کاهش حرارت سیستم، پرایمر ها در محل مناسب روی رشته مکمل متصل می شوند.

۳- مرحله Extension: در این مرحله که دمای آن برای آنزیم DNA پلیمراز مطلوب می باشد موجب توسعه پرایمر ها شده و همانند سازی DNA هدف انجام می گیرد. محصول PCR عبارت است از قطعه همانند سازی شده ای که دو طرف این قطعه سکانس پرایمر ها وجود دارند.

 

 فاکتور هایی که روی کار آیی PCR تاثیر دارند:

۱- بعد از ۲۵تا ۳۰ سیکل بعلت حرارت آنزیم دناتوره شده و غیر فعال می شود.

۲- غلظت زیاد رشته های هدف موجب Reannealing آنها شده و با پرایمرها رقابت می کنند.

روش PCR توسط مولیس کارمند شرکت Cetus ابداع گردید. ابتدا این کار توسط سه بن ماری با حرارت های مختلف انجام می گرفت و از آنریم کلنو بعنوان DNA polymerase استفاده می شد. این آنزیم در اثرحرارت دناتوره می شود و اجبارا باید دوباره در هر سیکل به واکنش اضافه شود. Saiki از آنزیم DNA polymerase مقاوم به حرارت که از باکتری ترموس آکواتیکوس خالص می شود و اصطلاحا Taq DNA polymerase گفته می شود استفاده کرد و امروزه واکنش PCR به صورت اتوماتیک انجام می گیرد.

 

پارامتر های موثر در PCR:

۱- زمان و دمای Denaturation بستگی به تعداد G و C دارد.

۲- دمای Annealing پرایمرها که باید ۴-۳ درجه کمتر از دمای ذوب پرایمرها باشد.

۳- زمان Primer extension که به تعداد بازهای بین دو پرایمر بستگی دارد.

۴- تعداد سیکلها

۵- Ramp (زمانی که طول می کشد تا دمای مبدا دستگاه به دمای مقصد برسد) هر چه این زمان کمتر باشد نتیچه کار بهتر است و واکنش زمان کمتری در دمای ناخواسته قرار می گیرد.

۶- غلظت dNTP ها و یون منیزیوم (اینها مجموعه ای را تشکیل می دهند که موجب فعالیت آنزیم پلیمراز می شوند و غلظت این دو ماده تابعی از یکدیگر می باشند).

۷- غلظت Template DNA (یک دهم تا یک میکروگرم می باشد) چنانچه DNA هدف بصورت مالتی کپی در ژنوم باشد بهتر است.

۸- اضافه کردن تشدید کننده های PCR  

۹- حذف مها رکننده های آنزیم از محیط

۱۰- بهتر است نقطه ذوب پرایمر ها شبیه هم باشد(Tm یکسان داشته باشند).





0 نظرات  سنگهای کیسه صفرا
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:15]  

معمولاً تنها علامتی که وجود دارد، بحرانهایی در عدم هضم غذا می باشد. گاهی اوقات نیز رنگ پوست به زرد کمرنگ می گراید ولی در بسیاری از موارد که سنگ کاملاً در کیسه صفرا شکل گرفته علائم آشکار دیگری وجود ندارد. بیمار مبتلا به این بیماری همیشه دچار سوء هاضمه می باشد. بیماری سنگ کیسه‌ صفرا سالانه میلیون‌ها نفر را مبتلا می‌کند در بیشتر موارد بدون علایم ظاهری است. ولی وقتی سنگ از کیسه‌ صفرا خارج و وارد مجرای صفراوی شود، ایجاد انسداد، درد و قولنج می‌نماید. در صورت انسداد، التهاب کیسه صفرا به ‌وجود می‌آید. هم ‌چنین رنگ مدفوع روشن وادرار پررنگ می‌شود و در صورت ادامه وضعیت، صفرا به عقب برگشته و موجب زردی و صدمه رسیدن به کبد می‌شود.

این سنگها بر دونوعند :

۱- نوع کلسترولی که ۷۵٪ سنگها را شامل می شود .

۲ -سنگهای رنگ دانه ای (۲۵٪)

چربی کلسترول در آب غیرمحلول است ولی در صفرا به صورت محلول می باشد. در بسیاری از افراد کلسترول صفرا زیاد از حد بوده و اشباع از کلسترول می باشد. در صفرای برخی از این افراد بلورهای کلسترول تشکیل می شود. رسوب تدریجی این بلورها باعث تشکیل سنگ می شود. بارداریهای متعدد، مصرف قرص ضد بارداری، چاقی، بیماریهای روده باریک و تنگی مجرای کیسه صفرا (باعث توقف صفرا می شود) زمینه را برای تشکیل سنگ های کیسه صفرا فراهم می نمایند .با این حال علت اصلی تشکیل سنگهای رنگ دانه ای به خوبی شناخته نشده است .

 

علائم بالینی سنگ های کیسه صفرا: در اکثر موارد سنگ های صفراوی بدون علامتند. انسداد مجرای کیسه صفرا با سنگ علت زمینه ای بروز علائم بالینی سنگ های صفراوی می باشد .

مهمترین علامت درد شکم می باشد. که در ناحیه راست وبالای شکم احساس می شود. درد در اغلب موارد به دنبال صرف غذای چرب بوجود آمده و منجر به تهوع و استفراغ می شود. در صورت عفونت سنگها منجر به التهاب کیسه صفرا ( کله سیستیت )‌می شوند. علاوه بر اینها به دنبال انسداد مجاری کبدی توسط سنگهای صفراوی یرقان یا زردی پدید می آید .

سنگهای کیسه صفرا با انجام سونوگرافی شکم تشخیص داده می شوند.

مسلماً شخصی که دچار این سنگها می شود نمی تواند وضعیت کاملاً سالمی را داشته باشد. اولین علامتی که باید توجه بیمار را جلب کند احساس پر بودن، سنگینی یا فشردگی معده است. ولی در اکثر موارد شخص متوجه نمی شود که چیزی خوب پیش نمی رود تا زمانی که چنان درد شدیدی احساس می کند که او را خمیده می سازد. متأسفانه در این حالت نیز بیماران وضعیت گوارشی را مسئول این وضعیت دانسته و تصور می کنند که این درد بعلت خوردن چیز نامناسبی ایجاد شده است .
در حالی که این دردها مربوط به قولنجهای کبدی هستند. این قولنجها پس از بحرانهای سوء هاضمه ای که هفته ها و گاهی اوقات ماهها طول کشیده اند بوجود می آیند .هنگامی که این سوء هاضمه همراه با کهیر باشد بهتر است به جستجوی علت آن بپردازید و اگر هیچ مسئله غیر عادی در رابطه با صفرا وجود ندارد امکان دارد این ناراحتیهای پوستی بر اثر تنبلی کبد ایجاد شده باشند. ولی اگر درد شدیدی در معده و حساسیت نسبت به فشار در سمت راست و کمی بالای ناف وجود دارد احتمال دارد که علائم مورد نظر بر اثر سنگ صفراوی ایجاد شده باشند .گاهی اوقات درد بسیار شدید بوده و یک یا دو روز طول می کشد. سپس بیمار بهبود یافته و در بعضی اوقات ماهها بدون آنکه چیز دیگری احساس کند می گذرد یا اینکه بمدت یک هفته قبل از بحران بعدی هیچ اتفاق نمی افتد .
همه این مسائل به زمانی بستگی دارد که سنگ دیگری در مجرای صفراوی جانشین سنگ قبلی شود.
این سنگها معمولاً به اشکال نامنظم و ناهموار و بریده هستند و هنگامی که از کانال صفراوی عبور می کنند درد شدیدی را ایجاد می نمایند.

با بررسی این علائم دیگر نیازی به ذکر مشکلات دیگری از قبیل زخمها، عفونتها و سوراخهای خطرناکی که ممکن است بر اثر آنها ایجاد شوند نیست زیرا چنین مسائلی از وظایف پزشک است .
اگر پس از سوراخ شدن ورم جداره شکمی نیز ایجاد شود تنها راه نجات بیمار عمل جراحی خواهد بود همچنین امکان دارد که در صورت انسداد کامل مجرای صفرا عمل جراحی تنها راه تسکین شخص باشد اما علائمی که از این اشعه استثنایی بوده و کاملاً به مهارت جراح بستگی دارد. در این مورد درمان ضرورتی ندارد بلکه مراقبتهای طبیعی باید به دقت انجام شوند. این مسئله چندان مهم نیست که بدانیم این انحراف تا چه حد غیر طبیعی است بلکه نکته مهم تصحیح و بازسازی این مشکل است.

عوامل مستعد کننده ایجاد سنگ های صفراوی کلسترولی عبارت است از:

۱- چاقی، که باعث افزایش ترشح کلسترول در صفرا می شود.

۲- کاهش وزن سریع

۳- هورمون های جنسی زنانه: هورمون استروژن، داروهای حاوی استروژن و قرص های ضدبارداری خوراکی به عنوان عوامل مستعد کننده شناخته شده اند.

۴- بیماری های روده کوچک و یا برداشتن آن در طی عمل جراحی

۵- افزایش سن

۶- کاهش تحریک کیسه ی صفرا به دنبال تغذیه وریدی طولانی مدت

۷- درمان با کلوفیبرات

۸- کاهش ترشح اسید صفراوی به دنبال سیروز صفراوی اولیه

۹- رژیم غذایی پرچرب

۱۰- آسیب طناب نخاعی

همچنین دیده شده است که، داشتن یبوست ، مصرف رژیم غذایی پر چرب،مصرف بیش از اندازه تخم مرغ، و فقدان ورزش و فعایت بدنی نیز در ایجاد رسوب صفراوی موثر است.

 

عوامل موثر در ایجاد سنگ های رنگدانه ای عبارت اند از:

۱- ژنیتک

۲- سیروز الکلی

۳- سن بالا

۴- عفونت مزمن سیستم صفراوی یا عفونت انگلی

 

علائم بیماری: وجود دو حالت تهوع و سرگیجه با هم دیگر از بهترین علائم سنگ صفرا و به طور کلی بیماری های کیسه صفراست. اغلب بیماران مبتلا به سنگ کیسه صفرا، بانوان چاق، با قدرت باروری و با شکم بزرگ و بالای چهل یا پنجاه سال می باشند. انسداد مجرا به وسیله سنگ موجب افزایش فشارداخل مجرا و اتساع این عضو می شود. که با انقباضات مکررصفراوی بر طرف نمی شود. نشانه ی دیگر، درد یا فشار شدید و مداوم در ناحیه ی سردل است. که اغلب به ناحیه ی بین دو کتف و کتف راست یا شانه انتشار می یابد. شروع دردها معمولاً ناگهانی است و در عرض چند دقیقه شدت آن بالا رفته و به حد ثابت می رسد. همچنین می تواند با شدت زیادی ۱ تا ۴ ساعت ادامه یابد و سپس به تدریج یا به سرعت بر طرف شود.

این دردها ممکن است به دنبال مصرف یک غذای چرب و خوردن مقادیر زیادی غذا بعد از یک دوره گرسنگی طولانی و حتی گاهی به دنبال یک غذای معمولی ایجاد شود. به طور معمول، درد در سه الی پنج ساعت بعد ازصرف غذا شروع می شود ولی گاهی بلافاصله بعد از مصرف غذا هم ظاهر می شود و خود را به شکل زخم های اثنی عشر نشان می دهد، منتها با این تفاوت که با خوردن غذا بهتر نمی شود و تنها با استفراغ کردن آرام می گیرد. درد با تهوع و دل به هم خوردگی و استفراغ همراه است. بسیاری اوقات با مصرف غذاهای چرب و سنگین، تخم مرغ، شکلات، کاکائو، شیرینی های خامه ای، درد شروع شده یا شدت می یابد.

وجود دو حالت تهوع و سرگیجه با هم دیگر از بهترین علائم سنگ صفرا و به طور کلی بیماری های کیسه صفراست. نفخ و آروغ زدن و عدم تحمل غذاهای چرب و سوء هاضمه نیز همراه با این بیماری دیده می شود.

سنگ کیسه صفرا غالباً نامشخص و مخفی است و مدت ها بدون آن که علامت مهمی از خود نشان دهد یا مزاحمتی فراهم آورد، باقی می ماند .

درمان: برداشتن کیسه صفرا توسط عمل جراحی بیماران را درمان می نماید اما در حالتهای خاصی که سنگهای کیسه صفرا بدون علامتند اقدام به درمان طبی جهت حل و دفع سنگها نیز جواب می دهد. 





0 نظرات  اندازه گیری پروتئین ادرار ۲۴ ساعته
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۷ تير  [21:12]  


اساس اندازه گیری پروتئین در ادرار به صورت كمی و نیمه كمی و كیفی بر پایه روشهای ایمونوشیمی، كدورت سنجی و شیمیایی با استفاده از نوارهای تشخیصی می باشد. در این میان روش كدورت سنجی به علت ساده و مقرون به صرفه بودن در آزمایشگاهها كاربرد بیشتری دارد. با توجه به تحقیقات انجام شده روش TCA با استفاده از طول موج ۴۰۵ نانومتر برای سنجش مقادیر كم پروتئین به عنوان روش انتخابی معرفی می شود.

 

ضمناً در بررسی روشها، عوامل كیفی شامل صحت، دقت، محدوده اندازه گیری، خطی بودن و یكنواختی نتایج در استفاده از كالیبراتورهای متفاوت تعیین گردیده و سپس روش اصلح انتخاب شده است.

 

اساس آزمایش

در این روش پروتئین ادرار توسط تری كلرواستیك اسید ۵/۱۲در صد رسوب داده می شود. كدورت ایجاد شده متناسب با مقدار پروتئین (آلبومین و گلبولین) موجود در ادرار است. غلظت پروتئین رسوب داده شده با در نظر گرفتن غلظت اسید، دما و زمان سپری شدن بین اضافه كردن اسید تا ایجاد رسوب پروتئین محاسبه می گردد.

 

جمع آوری نمونه

در این آزمایش می توان از ادرار بصورت انتخابی (Random) استفاده كرد ولی ادرار ۱۲ یا ۲۴ ساعته ترجیح داده می شود. البته نمونه ادرار ۱۲ یا ۲۴ ساعته باید بدون افزودن ماده نگهدارنده جمع آوری شده و در تمام مدت نمونه گیری، ظرف حاوی نمونه در محل خنك نگهداری شود. برای جمع آوری باید از ظرف تمیز و عاری از آلودگی استفاده نمود و به بیمار آموزش داده شود كه برای جمع آوری ادرار ۲۴ ساعته، از ساعت ۸ صبح تا ۸ صبح روز بعد تمامی نمونه های پس از ساعت ۸ بطور كامل جمع آوری شده ولی ادرار ساعت ۸ صبح روز اول جمع آوری نگردد. باید توجه نمود كه اگر اندازه گیری پروتئین ادرار در مدت ۴۸ ساعت پس از نمونه گیری انجام نمی شود، می توان نمونه را خوب مخلوط كرده و پس از تعیین حجم نمونه، بخشی از آن را تا روز انجام آزمایش در فریزر نگهداری نمود.

 

طرز تهیه TCA صد درصد ذخیره

به علت حالت خورندگی TCA باید تهیه محلول با احتیاط و با محافظت از چشمها و دستها انجام گیرد و پس از پایان كار ظروف مورد استفاده كاملاً شسته شوند.

۱۷۵ میلی لیتر آب مقطر دیونیزه شده را به یك ظرف حاوی ۵۰۰ گرم از TCA اضافه می كنیم. درب ظرف را بسته و به آرامی تكان می دهیم تا كاملاً حل شود. سپس تمام مواد را به طور كامل به یك بالن ۵۰۰ میلی لیتری منتقل می كنیم و حجم كل را به ۵۰۰ میلی لیتر می رسانیم. برای انحلال كامل طی مدت ۲۴ ساعت، محلول راگهگاه با عمل چرخش مخلوط می نمائیم.

محلول TCA صد درصد را در یك ظرف تیره و در دمای اتاق نگهداری می كنیم. این محلول برای ۱۲ ماه پایدار است.

 

طرز تهیه تری كلرواستیك اسید ۵/۱۲در صد (۷۶۵ میلی مول بر لیتر)

با استفاده از پیپت حجمی ۲۵ میلی متری، مقدار ۲۵میلی لیتر از محلول TCA۱۰۰درصد را به بالن ژوژه ۲۰۰ میلی لیتری منتقل می نماییم و با استفاده از آب مقطر حجم آن را به ۲۰۰ میلی لیتر می رسانیم. محلول حاصله را كاملا مخلوط كرده و در ظرف شیشه ای تیره در دمای اتاق نگهداری می نماییم. این محلول در دمای اتاق به مدت یك ماه پایدار است.

 

كنترل

از سرم كنترلهای تجاری به عنوان كنترل استفاده می گردد (رقتی برابر۳۰۰/۱ با استفاده از سرم فیزیولوژی تهیه می شود).

 

استاندارد

برای آزمایشهای روتین (روزانه) از سرم كنترلهایی ترجیحا با ارزش مرجع مانند precipath و  Biorad و precinorm مشابه استفاده می شود. برای انجام كار ابتدا غلظت پروتئین این سرم كنترلها را به مقداری كه امكان وجود آن در ادرار است می رسانیم. (برای رقیق كردن از سرم فیزیولوژی استفاده میشود)

لازم به ذكر است كه این روش تا ۵۰۰ میلی گرم بر دسی لیتر خطی می باشد، بنابراین نمونه ها اعم از ادرار و استاندارد باید طوری رقیق شود كه غلظت پروتئین موجود در آنها حداكثر ۵۰۰ میلی گرم بر دسی لیتر باشد.

توجه: از یك نوع نمونه كنترل نمی توان همزمان بعنوان كنترل و استاندارد استفاده نمود.

 

روش كار

۱) ۱۰ میلی لیتر از ادرار مورد آزمایش را سانتریفوژ نموده سپس با استفاده از نوار ادراری پروتئین آن را بررسی می كنیم و نتیجه را ثبت می نماییم. اگر غلظت پروتئین بیش از ۱+ بود نمونه ادرار را قبل از شروع آزمایش با سرم فیزیولوژی رقیق میكنیم. (نمونه های ۱+ تقریباً به نسبت ۵۰/۱ و نمونه های ۲+ تقریباً ۱۰/۱  و نمونه های ۳+ تقریباً ۱۵/۱ رقیق می شوند). اگر نیتریت ادرار مثبت باشد، می باید بیمار را برای نمونه گیری مجدد با رعایت شرایط نمونه گیری راهنمایی نموده و در صورت تكرار آلودگی نمونه، بیمار جهت مشاوره و لزوم بررسی نتایج كامل ادرار و احتمالاً درخواست كشت به پزشك معرفی گردد.

۲) برای هر آزمایش (نمونه، كنترل و استاندارد) دو لوله در نظر می گیریم (یكی به عنوان بلانك و دیگری به عنوان آزمایش)

۳) ۱/۶میلی لیتر از نمونه ادرار، استاندارد و كنترل را در لوله های مربوطه ریخته و سپس ۴/۰میلی لیتر از محلول TCA ۱۲/۵درصد به همه لوله ها اضافه می نماییم. و بعد به آرامی لوله ها را مخلوط می کنیم.

دما در این مرحله مؤثر بوده و می باید بین ۲۳ تا ۲۷ درجه سانتی گراد باشد.

لوله های بلانك را بعد از مدت ۲۰ دقیقه به مدت ۱۰ دقیقه با دور ۱۵۰۰ سانتریفوژ مینماییم.

لوله های آزمایش را بعد از ۳۵ دقیقه كاملاً مخلوط نموده و جذب نوری آنها را در طول موج ۴۰۵ یا ۴۵۰ نانومتر در مقابل مایع رویی بلانك مربوطه بدست می آوریم.

رعایت زمان ۳۵ دقیقه برای این آزمایش ضروری می باشد.

 

محاسبه

میلی گرم پروتئین در ادرار ۲۴ ساعته= ضریب رقت نمونه × حجم ادرار ۲۴ ساعته (میلی لیتر) × F × جذب نوری آزمایش

F= حاصل تقسیم مقدار استاندارد بر جذب استاندارد

با توجه به توانائی این روش برای سنجش مقادیر كم پروتئین (حدود ۲۵ میلی گرم در لیتر پروتئین و بیشتر)، از این روش می توان برای غربالگری وضعیت كلیوی جمعیتهای مستعد به بیماری كلیوی مانند مبتلایان به دیابت در راستای بررسی میكروپروتئینوری استفاده نمود.

در افراد سالم مقدار دفع پروتئین تام تا ۱۵۰میلی گرم بر لیتر در ادرار طبیعی می باشد.

 

نكات قابل توجه

۱) كدورت حاصله از اضافه شدن TCA به ادرار به دلیل وجود آلبومین و گلبولین می باشد.

۲) هر نمونه باید در مقابل بلانك مربوط به خود اندازه گیری شود.

۳) PH قلیایی و پیگمانهای ادرار باعث ایجاد نتایج مثبت كاذب می شود.

۴) دفع پروتئین در ادرار به طور دائم ثابت و مشخص نمی باشد و در دوره های ۲۴ ساعته تغییر قابل ملاحظه ای دارد. بنابراین برای اندازه گیری پروتئین دفع شده بهتر است از ادرار ۲۴ ساعته استفاده نمود.

۵) ممكن است بین نتایج بدست آمده از روش كدورت سنجی TCA و بررسی ادرار توسط نوارهای ادراری تفاوت وجود داشته باشد. مشاهده نتایج منفی یا مقادیر كمی پروتئین با نوار ادراری و نتیجه مثبت با روش TCA به طور همزمان ممكن است به دلایل زیر باشد:

وجود پروتئین Myeloma (گاما گلبولین و پروتئین بنس جونز) در ادرار.

نمونه های غیر هموژن به علت استفاده از داروهای خاص مانند Tolmetin و داروهای ضدالتهاب كه در درمان آرتریت روماتوئید استفاده می شود. متابولیتهای این داروها می تواند باعث ایجاد نتایج مثبت كاذب شود.




1 نظرات  کیسه‌های خون «بارکد بین‌المللی» دریافت می‌کنند
  تاریخ : ۱۳۸۹ دوشنبه ۲۱ تير  [19:59]  

سرپرست امور مهندسی سازمان انتقال خون ایران گفت: برای اولین بار در بین کشورهای درحال توسعه کیسه‌های خون در ایران دارای بارکد بین‌المللی می‌شوند.

دکتر سعیدرضا رحم‌دار در گفت‌وگو با خبرنگار «بهداشت و درمان» خبرگزاری دانشجویان ایران، با بیان این که ردیابی خون با این بارکد در سراسر دنیا به راحتی امکانپذیرست، اظهار داشت: از زمان جنگ خلیج‌فارس که بحث قرض دادن خون کشورها به یکدیگر مطرح شد این نیاز احساس شد که خونهای گرفته شده دارای یک بارکد بین‌المللی شوند.

وی گفت: با این بارکد به خوبی مشخص می‌شود خون ارسالی به سایر کشورها دارای چه گروه خونی، از چه فرد با چه سنی و یا ویژگی‌هایی است.

وی با بیان این که در حال حاضر خون‌های تهیه شده دارای بارکد هستند ولی نه بارکد ISPT، افزود: تا کنون 30 کشور در دنیا به ویژه کشورهای صنعتی دارای این بارکد بین‌المللی شده‌اند.

دکتر رحم‌دار با اشاره به اتصال پالایشگاه خون و فرآورده‌های خونی سازمان انتقال خون به یک شرکت خارجی ادامه داد: برای راه‌اندازی پلاسما فریز که برای رفع مشکلات واکنشی و حساسیتی پلاسماست دستگاهی به ارزش یک میلیون دلار وارد کشور شده است.

سرپرست امور مهندسی سازمان انتقال خون ایران در ادامه از واگذاری تولید کیسه‌های خون به یک شرکت داخلی خبر داد و یادآور شد: در نظر داریم از این پس تولید کیسه‌های خون را به شرکتی خصوصی و داخلی واگذار و سعی در ارتقاء بهبود کیفیت کیسه‌های خونی داریم.

به گفته وی، این کیسه‌ها باید از یکسری استانداردهایی نظیر وجود ماده ضدانعقاد در آن، استریلیزاسیون، قطر مناسب داخل لوله‌ای، سرعت جریان خون مناسب برخوردار باشند.




0 نظرات  اصول کلی حفاظت و پیشگیری از آلودگی کارکنان در محیط آزمایشگاه
  تاریخ : ۱۳۸۹ دوشنبه ۲۱ تير  [19:58]  

 

کلیات

 

کارکنان آزمایشگاه در معرض بسیاری از عوامل بیماری زا با منشأ خون، مایعات بدن و ...می باشند که از طریق ترشح و پاشیدن، فرو رفتن سوزن، وسایل شیشه ای شکسته، خراش و بریدگی و ... در تماس با چشم، بینی، دهان، پوست و ... باعث آلودگی می گردند. همچنین در محیط کاری آنها خطراتی در نتیجه کار با مواد شیمیایی سوزاننده، مواد رادیواکتیو، الکتریسیته، وسایل مکانیکی، آتش سوزی و ... وجود دارد که سلامتی آنها را تهدید می نماید.

 


 

میزان عفونت های ویروسی از طریق فرورفتن سوزن، بریدگیها و ... در مورد ویروس هپاتیت B ، ۶% تا ۳۰% ، در مورد ویروس هپاتیت C ، ۸/۱% و در مورد ویروس ایدز ۳/۰ % می باشد. در دهه گذشته، هر ساله حدود ۱۰۰ تا ۲۰۰ نفر از کارکنان مراکز بهداشتی درمانی ایالات متحده در نتیجه ابتلا به عفونت ویروسی هپاتیت B ناشی از محیط کار فوت نمودند.

 

تا کنون انتقال حداقل ۲۰ عامل بیماری زای مختلف بوسیله سوزن و صدمات ناشی از وسایل تیز گزارش گردیده است با توجه به اهمیت پیشگیری از آلودگی و خطرات محیط کاری در مورد کارکنان، این کتابچه در واقع راهنمایی عملی جهت تضمین ایمنی و بهداشت کارکنان می باشد که سعی گردیده است که دربرگیرنده تمام اصول حفاظتی در کلیه زمینه ها باشد. امید است که بکارگیری این اصول راهگشای حفاظت و ایمنی کارکنان آزمایشگاهها کشور باشد.
 

 

  سیگار کشیدن :

 

در تمامی بخشهای فنی آزمایشگاه استعمال دخانیات (سیگار، سیگارت و پیپت) ممنوع می باشد. این مواد میتوانند عامل مهمی جهت ایجاد آتش سوزی در ارتباط با حلال های قابل اشتعال باشند. همچنین انتقال آنها از میز کار به دهان می تواند به عنوان مخزنی جهت انتقال میکروارگانیسم ها و توکسین ها عمل نماید.

 

  غذا، آشامیدنی ها و مواد مشابه که سبب تماس هر چه بیشتر دست با دهان می گردد:

باید در تمام بخش های فنی آزمایشگاه از غذا خوردن، آشامیدن و یا انجام سایر اعمالی که سبب تماس دست را با دهان می گردد، خودداری نمود.

تصاویر جدید زیباسازی وبلاگ , سایت پیچک » بخش تصاویر زیباسازی » سری پنجم www.pichak.net کلیک کنید

 

نمونه های آزمایشگاهی (خون، ادرار، مدفوع و خلط و ...) می تواند حامل بسیاری از عوامل بیماری زا باشد این مواد که روزانه در بخش های مختلف آزمایشگاه جابجا می گردند و بعضی مواقع در یخچال های آزمایشگاه نگهداری می شوند، به عنوان یک منبع مهم آلودگی غذا و آشامیدنی ها تلقی می گردند.

 

 بهیچ وجه مواد غذائی را در یخچالهای بخشهای مختلف آزمایشگاه نگهداری ننمائید.

 

باید یخچالهای مخصوص مواد غذائی را در فضای آبدارخانه قرار داد. تنها با این روش می توان مطمئن شد که مواد غذائی با نمونه های آزمایشگاهی در یک یخچال نگهداری نمی شوند.

 

استفاده از دستکش

 

باید همیشه دستکش در اندازه های متفاوت و از مواد مناسب و مرغوب در تمام بخشهای فنی در دسترس باشد دستکشهایی از جنس لاتکس، نیتریل و یا وینیل، محافظت کافی را ایجاد می نمایند. دستکشهایی که از جنس لاتکس یا وینیل نازک تهیه شده باشند، محافظت کافی را در مقابل سوراخ شدن بوسیله وسایل تیز، ایجاد نمی نمایند.

 

دستکش ها باید در اندازه های تا مچ، آرنج و شانه در دسترس باشند.

 

 

 

نباید دستکش ها را هنگام انجام کار تعویض نمود بلکه باید بعد از اتمام کار این عمل را انحام داد. کارکنان آزمایشگاه باید اقدامات حفاظتی لازم را جهت جلوگیری از آلودگی محیط و پوست در مورد دستکش های آلوده انجام دهند.

 

- جهت اهداف مختلف باید از دستکش های متفاوتی استفاده نمود، شامل :

 

دستکش های لاستیکی یا چرمی که در مواقع کارهای سنگین، سر و کار داشتن با وسایل داغ و یا هنگام خالی کردن محفظه های محتوی مواد خطرناک استفاده می شود

 

دستکش های خانگی جهت تمیز نمودن، شستن وسایل شیشه ای و ضدعفونی کردن

 

دستکش های جراحی (لاتکس) در مواقع کار با خون، مواد خطرناک و ...

 

دستکش های پلاستیکی یکبار مصرف جهت مواقع اضطراری

 

دستکش ها نباید شسته شده و مجدداً مورد استفاده قرار گیرند، زیرا از کیفیت عملکرد و میزان نقش حفاظتی آنها کاسته می شود اگر دستکشها جهت استفاده مجدد با مواد شوینده و یا مواد ضدعفونی شسته شوند، ممکن است مواد شوینده سبب افزایش نفوذ مایعات از طریق سوراخهای غیر مرئی شده و یا مواد ضدعفونی باعث خراب شدن دستکش ها گردند. حلال های آلی سریعاً سبب خراب شدن دستکش های لاتکس گردیده و بعضی از حلال ها، دستکش های وینیلی را حل می نمایند.

 

می توان دستکش هایی مانند دستکش های لاستیکی خانگی را که استفاده عمومی داشته و ممکن است در تماس با خون بوده و یا جهت تمیز کردن و آلودگی زدایی بکار بروند، ضدعفونی و مجدداً استفاده نمود اما اگر بریدگی، سوراخ یا بدرنگی در آنها مشاهده گردید، باید دور انداخته شوند.

 

دستکش ها را باید بعد از پوشیدن و قبل از کار از نظر نقایص مرئی بررسی نمود.

 

پوشیدن دو جفت دستکش هنگام اتوپسی و یا زمانیکه امکان آلودگی با خون و مایعات بدن (مثل کار در بخش اورژانس) زیاد است، توصیه می گردد. بررسی ها نشان داده که آلودگی پوست در زمان استفاده از دو دستکش کمتر از زمان استفاده از یک دستکش اتفاق افتاده است.

 

همچنین جراحان باید هنگام جراحی از دو دستکش استفاده کنند که در این حالت میزان سوراخ شدن دستکش داخلی کمتر از میزان سوراخ شدن یک دستکش است.

 

بهر حال هنگام استفاد از دو دستکش نیز باید حفاظت فیزیکی کافی را در مقابل سوراخ شدن اتفاقی آنها بوسیله وسایل تیز مدنظر داشت.

 

گرچه بیشتر کارکنان آزمایشگاه از دستکش های لاتکس استفاده می کنند ولی حدود ۶ تا ۱۷% افراد ممکن است به لاتکس حساسیت داشته باشند که درماتیت های تماسی آلرژیک در نتیجه وجود مواد شیمیائی موجود در طی مراحل تولید لاتکس یا مواد دیگر دستکش ها دیده می شود. استفاده از دستکش های نخی و یا دستکش های بدون مواد شیمیائی معمولاً از بروز درماتیت های آلرژیک جلوگیری می کند. جهت جلوگیری از تماس با پروتئین های لاتکس باید از دستکش های حاوی پروتئین کم، دستکش های بدون پودر و یا دستکش های ساخته شده از جنس نیتریل، پلی اتیلن و یا مواد دیگر استفاده نمود.

 

در چه مواقعی باید دستکش پوشید؟

 

هنگام نمونه گیری، نقل و انتقال نمونه ها و انجام مراحل آزمایش و همچنین زمانی که دست ها با مواد آلوده، سطوح آلوده و یا وسایل آلوده در تماس هستند و نیز در موارد تماس با بافت، خون، سرم، پلاسما، مایع نخاع، ترشحات واژن، مایع منی، مایع حاصل از شست و شوی برنش، مایع سینوویال، جنب، پریتوان، آمنیوتیک، پریکارد، شیر پستان و یا دیگر مایعات بدن که ممکن است با خون آلوده شوند، باید از دستکش استفاده نمود. طبق توصیه CDC باید در موارد تماس با نواحی از بدن بیمار که به طور طبیعی استریل هستند، از دستکش استریل استفاده نمود. در مواقع تماس با مخاط و یا فعالیت های آزمایشگاهی احتیاج به استفاده از دستکش استریل نمی باشد. همچنین در فواصل تماس با بیمار باید دستکش ها تعویض گردند.

ـ بهیچوجه نباید بوسیله دست سوزن های استفاده شده از سرنگ یکبار مصرف جدا گردد و یا در پوشش سرسوزن روی آن قرار گیرد




0 نظرات  فراورده های خونی بسترسازی رشد و نگهداری سلول ها را انجام می دهند
  تاریخ : ۱۳۸۹ دوشنبه ۲۱ تير  [19:56]  

عضو هیئت علمی پژوهشکده بیوتکنولوژی با بیان این مطلب که فرآورده های خونی در محیط کشت سلولی با هدف تحقیقاتی و تولید استفاده می شود و مسئولیت بسترسازی رشد و نگهداری سلول ها را بر عهده دارد،‌افزود: در جهان از خون 350 نوع ساده بیولوژیک استفاده می شود.

مجتبی کمره، عضو هیئت علمی پژوهشکده بیوتکنولوژی در گفتگو با خبرنگار باشگاه خبرنگاران گفت: در حال حاضر در جهان از خون 350 نوع ماده بیولوژیک استفاده می شود و این فرآورده ها به علت آنکه دارای مواد مغذی مورد نیاز رشد سلول ها هستند و مسئولیت بسترسازی رشد و نگهداری سلول ها در بدن جانداران را برعهده دارند، در شرایط آزمایشگاهی به عنوان ایجاد کننده شرایط فشار به محیط بدن، مورد استفاده قرار می گیرند.

کمره در خصوص مواد استفاده از فرآورده های خونی اظهار داشت: مورد مصرف اکثر این فرآورده ها، در محیط های کشت سلولی و باکتری هایی بوده که با هدف های تشخیصی، تحقیقاتی و یا تولیدی استفاده می شود.

وی تصریح کرد: فرآورده های خونی به دلیل دارا بودن مولکول های بدن موجود زنده در مقابل بسیاری از روش های حذف آلودگی حساس بوده و تحت عملیات معمول استریل سازی قرار نمی گیرند، که به همین علت می توانند به راحتی منشأ انتقال و انتشار آلودگی باشند.

*** در اغلب کشورهای جهان از خون گوسفند در تهیه کشت سلولی در بدن انسان مورد استفاده قرار می گیرد

عضو هیئت علمی پژوهشکده بیوتکنولوژی در ادامه گفت: خون دفینزینه گوسفند از گوسفند سالم گرفته می شود و به دلیل حذف فیبرین، انعقاد در آن انجام نمی گیرد.

وی افزود: استفاده از خون انسان در محیط کشت بلادآگار به دلیل پاسخ ضعیف در مقابل برخی باکتری ها، آلودگی های ویروسی مانند هپاتیت و ایدز، احتمال وجود آنتی بادی و اثرات مضر مواد ضد انعقادی در برخی موارد توصیه نمی شودکه در این میان مزایای استفاده از خون گوسفند بیشمار است.

کمره در خصوص وضعیت کنونی مصرف فرآورده های خونی در جهان اظهار داشت: در اغلب کشورهای جهان از خون گوسفند و خون اسب در تهیه محیط کشت در بدن انسان مورد استفاده قرار می گیرد.

وی تصریح کرد:‌ خون گوسفند تا 21 روز قابلیت مصرف دارد و بهترین زمان مصرف آن، 15 روز پس از تولید است.

عضو هیئت علمی پژوهشکده بیوتکنولوژی خاطرنشان کرد: خون گوسفند صرفاً در تهیه محیط کشت کاربرد دارد و نباید برای مقاصد درمانی در انسان یا حیوان مورد استفاده قرار بگیرد.
















3 نظرات  شناسایی آمینواسیدها و پرئتئین ها
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۰ تير  [14:24]  


 

 

از روش های شیمیایی مختلفی برای تشخیص وجود آمینواسیدها در یک محلول استفاده می شود.

 

آزمایش های مختلف عبارت اند از :

 

1_ آزمایش نین هیدرین :

 

در این آزمایش ترکیبی به نام نین هیدرین با آمینواسید وارد واکنش می شود. در صورت برخورد و مجاورت این دو با یکدیگر ،گروه آمینی و کربوکسیل آمینواسید آزاد می شود . و خود آمینواسید به شکل به شکل یک ترکیب آلدهید CHO_R در می آید. و خود نین هیدرین به ماده ای به نام هیدرین دانتین  تبدیل می شود.

 

این واکنش برای هر اسیدآمینه ای پیش می رود. اما در اسیدآمینه پرولین تا حدی پیش می رود زیرا گروه متیل موجود در پرولین مانع از کامل شدن آزمایش می شود. به همین دلیل پرولین رنگ زرد ایجاد می کند.

 

یعنی  به طور خلاصه داریم :

همه آمینواسیدها نین هیدرین کمپلکس ارغوانی

پرولین + نین هیدرین زرد

 

2_آزمایش زانتو پروتئیک :

 

این آزمایش برای تشخیص آمینواسیدهای دارای حلقه بنزنی است. مانند: فنیل آلانین، تیروزین، تریپتوفان به طوری که این اسیدهای آمینه در مجاورت اسید نیتریک و کاتالیزور H2SO4  ایجاد دی نیتروتیروزین و فرم کینوئیدی در مجاورت سود، رنگ زرد مایل به نارنجی به خود می گیرد.

 

3_آزمایش میلون :

 

این آزمایش برای تشخیص آمینواسید تیروزین می باشد که دارای حلقه فنولی یا اگر این آمینواسید موجود باشد رنگ قرمز خوشرنگی به محلول می دهد.

 

4_آزمایش هاپکینز_کول :

 

این آزمایش برای تشخیص آمینواسید تریپتوفان می باشد که دارای حلقه اندولی است.اگر این آمینواسید موجود باشد،رنگ ارغوانی به محلول می دهد.

 

تریپتوفان + گلی اگزالیک اسید   ←   کمپلکس ارغوانی رنگ

 

5- آزمایش ساکاگوچی :

 

این آزمایش برای تشخیص اسید آمینه آرژنین است.

 

آرژنین ، گروه Rش دارای ساختار گوانیدین می باشد.

 

در صورت وجود آرژنین رنگ قرمزی در محلول ایجاد می شود.

 

ریشه گوانیدین   +   آلفا نفتل و هیپوبرمیت سدیم   ←   ترکیب قرمز رنگ

 

 

 

6- آزمایش استات سرب :

 

از این آزمایش برای تشخیص آمینو اسید گوگرددار مثل سیستئین و متیونین استفاده می شود.

 

در این آزمایش از سود هم استفاده می شود.

 

اگر سیستئین موجود باشد رسوب سیاه رنگ PbS ایجاد می شود.

 

7- آزمایش بیوره :

 

از این آزمایش برای تشخیص وجود پروتئین در محلول استفاده می شود.

 

به طور کلی از آنجایی که پروتئین ها هم گروه آمین و هم گروه کربوکسیلشان اکثرا درگیر پیوند است، نمی توان از آزمایش های آمینو اسیدی برای تشخیصشان استفاده کرد.

 

درصورتی که رنگ مایل به بنفش ایجاد شود نشان از وجود پروتئین و مثبت بودن آزمایش است.

 

8- آزمایش سولفو سالیسیلیک اسید :

 

یک روش دیگر شنایایی پروتئین استفاده از سولفو سالیسیلیک اسید و یا اسید تری کلرو استیک اسید می باشد.به طوری که این ترکیبات گروه های هیدروکسیل را می پوشانند در نتیجه ساختار پروتئین تغییر کرده و رسوب سفید رنگی ایجاد می کند.

 

پروتئین +  سولفو سالیسیلیک اسید/اسید تری کلرو استیک اسید      حلقه سفید رنگ مابین آنها

 

9- آزمایش پاولی :

 

این آزمایش به هیستیدین و تیروزین و همچنین تریپتوفان جواب مثبت می دهد

 

این آمینو اسید ها دارای حلقه فنولی و ایمیدازولی هستند.

 

رنگ قرمز تولیدی در محلول نشان دهنده ی وجود این اسیدهای آمینه است.

 

سولفانیلیک اسید  + HNO2    +  HCl    ترکیب دی آزونیوم   +    2H2O  

 

تیروزین  + ترکیب دی آزونیوم        رنگ دی آزوئیک (قرمز)

 

10- آزمایش مورنر :

 

این تست  اختصاصا تیروزین را جدا میکند.(فقط حلقه فنولی). به طوری که پودر تیروزین در مجاورت معرف مورنر و گرما به آرامی جوش کرده و رنگش سبز می شود.

 

روش کار:

 

1-نین هیدرین :

 

1-2 سی سی محلول اسید آمینه + چند قطره محلول نین هیدرین  5 ذقیقه در بن ماری جوش

 

با آب مقطر نیز Blank می گذاریم.

 

همه آمینواسیدها جواب مثبت می دهند ارغوانی

 

پرولین  زرد

 

آب مقطر    بی رنگ

 

2- گزانتوپروتئیک :

 

1 سی سی محلول اسید آمینه + 1 سی سی اسید نیتریک غلیظ (زیر هود)   1-2 دقیقه در بن ماری جوش زیر هود

 

با آب مقطر و یا با آمینو اسید بدون حلقه بنزنی Blank می گذاریم.

 

آمینواسیدهای دارای حلقه بنزنی جواب مثبت می دهند    رنگ زرد مایل به نارنجی

 

تا اینجا تغییر رنگ زیاد شدید نیست. در نتیجه محلول را خنک کرده بعد قطره قطره آمونیاک را با احتیاط کامل به محلول می افزاییم تا شدت رنگ بیشتر شود.

 

گلیسین     بی رنگ

 

3- پاولی :

 

1 سی سی + 2 سی سی محلول اسید آمینه   در آب یخ خنک می کنیم

 

+ 1 سی سی محلول نیتریت سدیم  3 دقیقه در آب یخ می گذاریم

 

+ 2 سی سی محلول کربنات سدیم

 

آمینو اسیدهای دارای حلقه فنولی و ایمیدازولی جواب مثبت می دهند  رنگ زرد لیمویی

 

گلسیسن بی رنگ

 

تیروزین     زرد لیمویی و شفاف

 

تریپتوفان     زرد لیمویی و کدر

 

4- بیوره :

 

2 سی سی محلول پروتئین + هم حجم آن (2سی سی ) محلول سود 10% + 2-3 قطره سولفات مس

 

از آمینو اسید به عنوان Blank استفاده می کنیم.

 

در محلول پروتین هاله دی فازیک و حلقه بنفش  ایجاد می گردد.

 

تریپنوفان     آبی (رنگ خود سولفات مس )

 

5- مورنر :

 

3 سی سی معرف تیروزین (مورنر) + مقداری پودر تیروزین   سرش را با پارافیلم می بندیم و آرام آرام جوش می دهیم

فقط تیروزین چون حلقه فنولی دارد به این تست پاسخ مثبت می دهد. سبز




0 نظرات  تشخیص کیفی لیپیدها
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۰ تير  [14:12]  

1- حلالیت چربی ها:

یکی از آزمایش های ساده برای تشخیص چربی ها آزمایش حلالیت چربی ها در حلال های مختلف است.

چربی ها در حلال های آلی مثل کلروفرم و الکل گرم قابل حل شدن هستند.

اگر الکل (اتانول) را حرارت دهیم قابلیت حل کردن چربی را دارد.اما اگر چربی را در آب بریزیم تشکیل میسل می دهد.در میسل در واقع دم های غیر قطبی در داخل و سرهای قطبی به سمت خارج یعنی آب قرار دارند.مثلا OH کلسترول به سمت آب قرار می گیرد و زنجیره اش به سمت داخل قرار می گیرد.پس پس از ریختن روغن در آبخالت قطره قطره ایجاد می شود اما در حلال های آلی قابل حل هستند.

 

برای تشخیص اسید های چرب غیر اشباع 3 روش وجود دارد :

 

2- استفاده از آب برم :

برم در محلول اسید چرب اشباع به رنگ زرد است، اما وقتی آب برم را به یک اسید چرب غیر اشباع اضافه می کنیم آب برم بی رنگ می شود نا زمانیکه تمام باندهای دوگانه اشباع شوند و رنگ زرد تثبیت شود،زیرا برم روی باندهای دوگانه می نشیند.

 

3- استفاده از ید :

بعد از اضافه کردن ید به محلول اسید های چرب غیر اشباع بی رنگ می شود.در حالیکه در محلول اسید های چرب اشباع به رنگ قهوه ایست.

 

4- استفاده از پرمنگنات پتاسیم +اسید سولفوریک غلیظ :

در این روش پرمنگنات پتاسیم در محلول آبی تبدیل به هیدروکسی می شود و در مجاورت اسید سولفوریک غلیظ تشکیل ترکیبی به نام اکوپسی می دهد

 

برای تشخیص کلسترول 2 روش وجود دارد :

 

5- روش سالکوفسکی :

در این روش به محلول کلسترول (کلسترول + کلروفرم) اسید سولفوریک غلیظ اضافه می کنیم .SO4 به COOH کلسترول می چسبد و کمپلکسی آجری رنگ ایجاد می کند.

 

6- آزمایش لیبرمن-بورشارد :

در این روش به محلول کلسترول علاوه بر اسید سولفوریک غلیظ ،انیدریک اسید نیز اضافه می کنیم.SO4 به COOH کلسترول می چسبد و همچنین انیدریک استیک به عنوان آبگیر عمل کرده و یک واحد آب از کلسترول جدا می کند و کمپلکس سبز تیره رنگی ایجاد می کند.

آزمایش تشخیص گلیسرول:

 

7-تشخیص گلیسرول :

در گلیسرول سه عامل الکلی وجود دارد ، گلیسرول در مجاورت یک عامل آب گیر مثل دی سولفات پتاسیم و یا دی سولفات سدیم و بی کربنات سدیم و حرارت ترکیبی آلدهیدی بنام آکرولئین را تشکیل می دهد.این ترکیب به صورت بخارات سفیدی در روی شعله متصاعد می شود که بوی تند و زننده ای دارد.

 

روش کار :

 

آزمایش سالکوفسکی :

 

چند میلی گرم از ماده(کلسترول) را در لوله آزمایش ریخته و در 3 میلی لیتر کلروفرم حل کرده ،3 میلی لیتر H2SO4 خالص به آن می افزاییم و به آرامی تکان می دهیم. صبر می کنیم دو لایه ی محلول جدا شوند.لایه ی بالایی کلروفرم است و لایه ی پایینی آن اسید سولفوریک است که به رنگ آجری است.

 

آزمایش لیبرمن-بورشارد :

 

یک نمونه محلول کلروفرمی کلسترول مانند آرمایش فبل تهیه کنید.و به آن 10 قطره انیدریک اسید و 2 قطره H2SO4 غلیظ اضافه کرده و به آرامی تکان دهید و بگذارید بماند.رنگ سبزی نمایان می شود.این آزمایش از سالکوفسکی حساس تر است.

 

آزمایش تشخیص گلیسرول :

 

در لوله ی آزمایش کاملا خشکی یک یا دو قطره گلیسرول بریزید و سپس قدری پودر سدیم هیدروژن فسفات به آن اضافه کنید. سپس مخلوط را روی شعله حرارت دهید.

 

بخارات سفید آکرولئین متصاعد شده بوی مشخصی دارد و یاعث تحریک دستگاه تنفسی می گردد.

 

آزمایش تشخیص چربی های اشباع نشده :

 

چند قطره روغن را در 3 میلی لیتر اتانول گرم حل کنید.سپس چند قطره آب برم اضافه کنید و پس از هر قطره لوله را تکان دهید.

 

روغن باعث بی رنگ شدن آب برم می شود.اگر به جای روغن آب مقطر بریزیم نمی تواند آن را بی رنگ کند.اگر یک

 

ا در 3 میلی لیتر اتانول گرم حل کنید.سپس چند قطره آب برم اضافه کنید و پس از هر قطره لوله را تکان دهید.

روغن باعث بی رنگ شدن آب برم می شود.اگر به جای روغن آب مقطر بریزیم نمی تواند آن را بی رنگ کند.اگر یکباهره خیلی برم بریزیم واکنش برمی گردد و بی رنگ نمی شود.





0 نظرات  رنگ آمیزی اسید فاست
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۰ تير  [14:7]  

اسید فاست بمعنای مقاومت در مقابل رنگ بری با یک رنگ بر اسیدی می باشد. این خاصیت در باکتریها بسیار نادر است و فقط باکتریهای جنس مایکوباکتریوم و بعضی گونه های جنس نوکاردیا ، اسید فاست هستند. استافیلوکوکوس اپیدرمیس را هم می توان جزء باکتریهای اسید فاست دانست.

بطور کلی در دیواره سلولی باکتریهای اسید فاست مقدار چربی بسیار زیاد است (خصوصا در مایکوباکتریومها) و آنها مقادیر نسبتا زیادی مواد چربی ، مثل اسیدهای چرب ، مومها و چربیهای پیچیده دارند. دیواره سلولی این ارگانیسمها شبیه موم بوده بنابراین نسبتا غیر قابل نفوذ هستند. این نفوذ ناپذیری در برابر مواد ضد عفونی کننده هم به این باکتریها مقاومت بیش از حدی می دهد. همچنین آنها را در برابر خشک شدن مقاوم می کند و برای مدتهای طولانی می توانند در خلط یا دیگر مایعات خشک شده بدن باقی بمانند. ولی باسیل سل توسط پاستوریزاسیون و سترون سازی عادی توسط حرارت با آسانی از بین می رود.

 

 

دراین رنگ آمیزی بخاطر وجود دیواره سلولی نفوذ ناپذیر مومی ، برای نفوذ دادن رنگ اولیه که کربول فوشین می باشد انجام اقدامات ویزه ای ضروری میباشد. رنگ اولیه همراه با فنل 5% مایع (اسید کربولیک) تهیه می شود تا نفوذ با یاخته تشدید شود. حرارت هم بعنوان یک عامل نفوذ دهنده در اینجا بکار می رود . همینکه رنگ به دیواره سلولی نفوذ کرد ، سلول باکتری بخاطر خاصیت اسید فاست بودن ، علی رغم بکار بردن رنگ برهای قوی رنگ خود را حفظ می کند . سلولها اسید فاست رنگ اولیه را حفظ می کنند و در زیر میکروسکوپ برنگ قرمز دیده می شوند . در صورتیکه میکروبهای غیر اسد فاست رنگ ثانویه را جذب کرده و به رنگ آبی در می آیند.

روش رنگ آمیزی اسید فاست :

1-        ابتدا یک گسترش از باکتری روی لام تهیه کنید.

2-        بعد از طی کردن مراحل تثبیت با حرارت ، سطح لام را با رنگ کربول فوشین آغشته کنید.

3-        لام را حرارت دهید تا رنگ تبخیر شود(شعله را وارونه کنید و از روی رنگ بطور مکرر عبور دهید ) با شروع تبخیر رنگ از روی لام دوباره شعله را از روی رنگ عبور دهید و بعد آنرا دور کنید و اجازه ندهید رنگ بجوشد یا گستره خشک شود . به موازات تبخیر رنگ از روی لام ، کربول فوشین بیشتری به آن اضافه کنید. این عمل باید 5 دقیقه ادامه یابد.

4-        لام را سرد کنید بعد شستشو دهید تا نشکند.

5-        لام را کج کنید تا رنگ اضافه خارج شود و بعد آنرا بشوئید.

6-        سطح لام را با اسید- الکل آغشته کنید. ماده رنگ بر در این رنگ آمیزی HCL 3% در اتانول 95% است که این اسید الکل یک رنگ بر بسیار قوی است  و بگذارید 15 تا 30 ثانیه بماند . لام را با زاویه 45 درجه نگهدارید و محلول رنگ بر را قطره قطره روی آن بریزید . اگر خروج رنگ قرمز با محلول رنگ بر ادامه یافت دوباره لام را با اسید الکل آغشته کنید . زمانی که دیگر رنگ قرمز خارج نشد مرحله بعدی را انجام دهید . معمولا رنگبری کامل مایکوباکتریوم مشکل است .

7-        لام را شستشو دهید .

8-        سطح لام را با آبی متیلن لوفلر (رنگ ثانویه) آغشته کنید و بگذارید 1 دقیقه بماند.

9-        رنگ را خالی کرده و لام را بشوئید.

10-    لام را با کاغذ خشک کن به آرامی خشک کنید یا بگذارید در حالت زاویه دار در مجاورت هوا خشک شود.

گسترش را میکروسکوپ و روغن سدر بررسی کنید.

طرز تهیه رنگها و محلولها :

-            کربول فوشین                      

فوشین بازی                         3/. گرم

اتانول 95%                         10سی سی

فنل متبلور                           5 گرم

آب مقطر                             95 سی سی

فوشین را در اتانول حل کنید . در ظرف دیگر بلورهای فنل را در آب حل کنید بعد دو محلول را با هم کاملا مخلوط کنید.

-            رنگ بر اسید - الکل

اسید HCL 37%                  3 سی سی

اتانول 95%                         97 سی سی

اسید را به اتانول اضافه کرده و خوب مخلوط کنید.

-            آبی متیلن لوفلر

آبی متیلن                             3/.گرم

اتانول 95%                         30 سی سی

آب مقطر                             100 سی سی

ابتدا آبی متیلن را در اتانول حل کنید . بعد آب مقطر را اضافه کرده و خوب مخلوط کنید . در پایان محلول را با استفاده از کاغذ صافی و قیف صاف کنید.




0 نظرات  مثال هایی از محیط کشت های مهم و کاربردی
  تاریخ : ۱۳۸۹ يکشنبه ۲۰ تير  [14:4]  

 

١- پپتون واتر :

افتراقی است.برای جداسازی باکتری های تخمیر کننده ی قند و نمونه های مشکوک به وبا (مدفوعی)استفاده می شود.

 

2- پپتون واتر قلیایی :

افتراقی است.برای جداسازی vibrio cholera  ( عامل وبا ، قلیا دوست) استفاده می شود.

 

3- نوترینت آگار :

معمولی است.برای رشد اکثر باکتری هاست.آگار دارد و جامد است.

 

4- نوترینت براث :

معمولی است. برای رشد اکثر باکتریهلست.فاقد آگار بوده و مایع است.

 

5 - blood agar :

غنی شده است. باکتری هایی که توانایی لیز کردن  خون را دارن رشد می یابند.(نوترینت آگار + خون)

در واقع با بلاد آگار الگوی هولیز را می توانیم تشخیص دهیم

انواع باکتریها از نظر لیز خون:

a-بتا هولیتیک : لیز کننده ی کامل خون  ←هاله سفید رنگ در plate

b-آلفا هولیتیک : لیز کننده ی ناقص خون   ←هاله سبز رنگ در plate

 non-hemolytic-c : لیز نکننده ی خون ←بدون هاله

 

6- chocolate agar :

 

غنی شده است.تحت دمای زیاد (60-70 درجه) به آن خون اضافه می شود.به همین دلیل رنگ قهوه ای شکلاتی می گیرد.

 

باکتری هایی که نیاز به مواد اختصاصی حاصل از همولیز دارند (مانند نایسریاها و هموفیلوس های پاتوژن ) در شکلات آگار رشد می کنند.

 

7- modified chocolate agar :

 

غنی شده است.اگر شکلات آگار را به جای اینکه از پایه ی بلاد آگار بسازیم از تریپتیکاز سوی آگار (TSA)(و یا از مولر هینتون آگار)  بسازیم، شکلات آگار تغییر یافته ساخته ایم.

 

8- Mac Conkey :

 

افتراقی و انتخابی است.برای جداسازی خانواده انتروباکتریاسه و لاکتوز مثبت ها و منفی ها استفاده می شود.(رنگشان متفاوت است)

 

9- ائوزین متیلن بلو (EMB) :

 

افتراقی و انتخابی است.برای جداسازی باکتری های گرم منفی به کار می رود.مثلا اکلای در این محیط رنگ و جلای فلزی میگیرد.

 

10-Thayer-Martin :

 

انتخابی است.برای جداسازی باکتری های گرم منفی است.حاوی آنتی بیوتیک است.

 

١١- DNAase-agar :

افتراقی است.برای رشد باکتری های دارای آنزیم تجزیه کننده ی DNA است.مثل استافیلوکوکوس اورئوس

 

12- Manitol - Salt Agar :

انتخابی است. رای رشد باکتری های مقاوم به غلظت بالای نمک و خمیر کننده ی قند مانیتول است.

در صورت تخمیر قند توسط باکتری اندیکاتور رنگ زرد را نشان می دهد.(PH=اسیدی)

 

13- DCA :

افتراقی و انتخابی است.رای رشد باکتری های پاتوژن مثل سالمونلا و شیگلا است.( نمونه مدفوعی )

 

14- مولر هینتون آگار MHA :

پایه یا معمولی است.برای آنتی بیوگرام به کار می رود.مثل هموفیلوس آنفولانزا

 

15- کاستانیدا :

محیط کشت دو فازی برای کشت خون و مغز استخوان است.مثل بروسلای عامل تب مالت

 

16- کربوکسیلاز تست مدیوم :

اختصاصی است.برای سالمونلا ، شیگلا  ، ویبریو

 

17- Egg Yolk Agar :

اختصاصی است.برای جداسازی باکتری های بی هوازی مثل کلستریدیوم پرفریناژنز به کار می رود.

 

18- S.Collin Agar :

اختصاصی است.برای جداسازی باکتری های تجزیه کننده S.Collin  به کار می رود.رنگ محیط قهوه ای متمایل به سیاه می شود.

 

19- لوفلر سرم :

اختصاصی است.برای جداسازی کورینه باکتریوم دیفتریا به کار می رود.سرم اسب به این محیط افزوده می شود.

 

20- لوونشتاین - جانسون :

اختصاصی است.برای جداسازی مایکو باکتریوم توبر کلوسیز ( عامل سل ) به کار می رود.نمونه بالینی آن خلط است.

 

21-کریشنر :

اختصاصی است. برای جداسازی مایکوباکتریوم توبرکلوسیز به کار می رود.نمونه بالینی آن خون است.

 

22-OF-Oxidation Fermentation:

اختصاصی است.برای جداسازی باکتری های اکسید کننده و تخمیر کننده به کار می رود.

 

23- VP، MR :

افتراقی است.برای جداسازی انتروباکتریاسه هاست.رنگ محیط قرمز می شود.

 

24- سالمونلا شیگلا آگار:SSA:

انتخابی است.برای جداسازی سالمونلا و شیگلا از بقیه به کار می رود.در اینجا مجاز به اتوکلاو نیستیم.

 

25- سلنیت F :

غنی کننده است.تعداد باکتری ها راافزایش می دهد.در کشت مدفوع استفاده می شود.

 

26-CS-Simmon Citrate agar:

افتراقی است.رنگ خود محیط در حالت عادی سبز است.برای جداسازی باکتری های انجام دهنده ی چرخه گلی اکسیلات به کار می رود.

سیترات + : رنگ محیط آبی می شود

سیترات - : رنگ محیط سبز می ماند.

 

27- سرم تلورید آگار :

اختصاصی است.مخصوص کورینه باکتریوم دیفتریا است.رنگ محیط سیاه می شود.

 

28-اوره آگار: کریستانسین :

اختصاصی است.برای جداسازی باکتری هایی که دارای آنزیم اورئاز هستند.مثل هلیکوباکترپیلوری.

 

29 - XLD :

افتراقی و انتخابی است. جداسازی سالمونلا و شیگلا از بقیه.

 

30-ژلاتین آگار :

اختصاصی است.برای جداسازی باکتری های تجزیه کننده ژلاتین و آگار به کار می رود.محیط از مایع به جامد در می آید.









نظرات :
نام کاربری :
نام رمز :
 

آدرس این وب لاگ
 
صفورا افضل نیا
safoora
آرشيو نوشته ها
1389/9   1389/6   1389/12  
1389/8   1389/5   1389/11  
1389/7   1389/4   1389/10  
پیوندها
اتاق عمل دانشگاه علوم پزشکی گیلان
علوم آزمایشگاهی در ایطاها
علوم آزمایشگاهی دانشگاه علوم پزشکی گیلان
پیاده سازی و اجرا : پریسان  

کلیه حقوق این سایت برای  وب سایت جامع علوم آزمایشگاهی و پزشکی فاسکو محفوظ است ©

ویروس, میکروب شناسی, stained, ميكروبها, belli, بیلی روبین, ميكروب, مکیدن, نامیرای, استافیلوکوکوس, متابولیزم, WBC, کربوهیدرات, گویچه, کامپیوتری, نوتروفیل, ضربه و تحريكات مكانيكي, Arsenazo, لوگل, الایزای, هيپربيلي, میکرسکوپ, توبرکولین, گوارش, Salmonella, استیلکولین, Klebsiella, پروب‌هاي, میکرومتر, آزمايش‌, تزریق درمانی, سیستولیک, ميوكارد, میکروزومال, اصل اسپور سازی, مضرات لیموترش , ويتامين, میکروولها, ویروسی, استات, گلوکورونیک, خونریزی از بینی و دهان, کلومیفن, داروي گياهي انعقاد خون, كوآنتل, پلاکت‌ها, میکروتوم, هیپوتیروئیدیسم, میوکارد), مدفوعي, نوتروفیلها, تشخیص آنفولانزای خوکی, HIGH DENSITY LIPOPROTEIN, C-Peptide, متیلن, اگزالیک, رادیکال‌های, رحمی, لوسین, آندومتر, اصطلاحات پزشکی و آزمایشگاهی, ویتامین, کاتتریزاسونی, اکسیتوسین, Fuadin, کاروتنوئیدها, کالیبره, هایپرهیدروز, سایکولوژیک, پریسنتریک,